沙門氏菌檢驗流程詳解（一）

發(fā)布時間： 2021-12-02

年終歲末，重磅福利！

多少個日夜，我們被沙門檢驗的復(fù)雜流程搞的頭暈?zāi)X脹！

多少次回首，我們被沙門檢驗的干擾菌株搞的身心俱疲！

不要彷徨，不要迷茫。

陸橋技術(shù)部為微生物檢驗員傾力打造《沙門氏菌檢驗流程詳解》系列文章。

通過原理幫您照亮檢驗流程中隱秘的角落。

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從此天塹變通途。

由于文章內(nèi)容過于豐富，篇幅過長，故分四期給大家呈現(xiàn)。

本期主要帶大家認識沙門，并揭示增菌的秘密。

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沙門氏菌簡介

沙門氏菌屬（Salmonella）是一群寄生在人類和動物腸道中，生化反應(yīng)和抗原結(jié)構(gòu)相關(guān)的革蘭氏陰性桿菌。沙門氏菌屬細菌的血清型現(xiàn)已達2500多種。根據(jù)DNA同源性，分兩個種，即腸道沙門氏菌（S.enterica）和邦戈沙門氏菌（S.bongori）。腸道沙門氏菌又分6個亞種，能感染人類的沙門氏菌血清型，約1400多種，主要在第一亞種中，即腸道沙門氏菌腸道亞種（S. enterica subsp. Enterica）。

沙門氏菌屬中少數(shù)血清型如傷寒沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌和丙型副傷寒沙門氏菌是人的病原菌，對人類有直接的致病作用，引起腸熱癥，對非人類宿主不致病。絕大多數(shù)血清型宿主范圍廣泛，家畜、家禽、野生脊椎動物以及冷血動物、軟體動物、環(huán)形動物、節(jié)肢動物（包括蒼蠅）等均可帶菌，其中部分沙門氏菌是人獸共患病的病原菌，可引起人類食物中毒或敗血癥。

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沙門氏菌的生物學特性

2.1 形態(tài)與染色

革蘭氏陰性桿菌，大?。?.6-1.0）μm×（2-4）μm。有菌毛。除雞沙門氏菌和雛鴨沙門氏菌等個例外，都有周身鞭毛。一般無莢膜，均無芽孢。

沙門氏菌檢驗流程詳解（一）

2.2 生化反應(yīng)與培養(yǎng)特性

兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂平板上可生長。不發(fā)酵乳糖或蔗糖，能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和甘露糖。除傷寒沙門氏菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣外，其他沙門氏菌均產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

2.3 抵抗力

沙門氏菌對理化因素的抵抗力較差，濕熱65℃、15-30min即被殺死。對一般消毒劑敏感，但對某些化學物質(zhì)如膽鹽、煌綠等的耐受性較其他腸道菌強，故用作沙門氏菌選擇培養(yǎng)基的成分。本菌在水中能存活2-3周，糞便中可存活1-2個月，在冰中能存活更長時間。

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沙門氏菌檢驗流程

（GB 4789.4-2016）

所有定性檢驗的流程都是層層篩選的，每層都排除一些非目標菌，這樣最后得到的就是我們要檢的目標菌。在方法建立的時候，每一步試驗都是經(jīng)過驗證的，所以檢驗過程中不能跳步。沙門氏菌檢驗是所有定性檢驗項目中步驟最全的，包括樣品處理、預(yù)增菌、選擇性增菌、選擇性分離、純化、生化鑒定和血清學鑒定。比如我們就不能越過生化鑒定，直接做血清學鑒定，那樣會很容易出假陽性?，F(xiàn)在我們就從第一步開始給大家介紹一下沙門氏菌的檢驗。

沙門氏菌檢驗流程詳解（一）

3.1 樣品處理及預(yù)增菌

無菌操作稱取25g（mL）樣品，置于盛有225mL緩沖蛋白胨水（BPW）的無菌均質(zhì)杯、均質(zhì)袋或合適容器內(nèi)，根據(jù)標準要求進行均質(zhì)。若樣品為液體，即可以均質(zhì)，也可以震蕩混勻。于36℃±1℃培養(yǎng)8h-18h。

樣品處理時注意避免樣品間交叉污染；均質(zhì)袋與均質(zhì)器的組合是目前常用的均質(zhì)方式；BPW的預(yù)增菌對沙門氏菌檢驗尤其重要，因為食品加工中采用的各種工藝（冷凍、加熱、干燥、高鹽等）使得菌體細胞不同程度地受損，受損的菌株會漏檢，在食品存放過程中自我修復(fù)后能引起人的疾病。BPW為非選擇性的增菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)過程中緩沖體系能將培養(yǎng)基維持在較高pH，有利于受損細胞的恢復(fù)。BPW具體原理請參考陸橋官網(wǎng)緩沖蛋白胨水（BPW）。

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3.2 選擇性增菌

將培養(yǎng)后BPW搖勻，取1mL轉(zhuǎn)種于10mL 四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB），于42℃±1℃培養(yǎng)18h-24h，同時再取1mL轉(zhuǎn)種于亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC），于36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h。

TTB增菌液的配制有兩個注意事項，一是碳酸鈣是TTB的正常成分，作用是中和吸收有毒性的代謝物質(zhì)（主要是培養(yǎng)基酸堿度的變化對菌生長的影響）。但是碳酸鈣不溶于水，所以TTB有沉淀是正常的，分裝時一定搖勻分裝。二是四硫磺酸鈉是TTB抑制性的核心成分，培養(yǎng)基也以此命名，但成分表中并沒有四硫磺酸鈉，它是在碘液煌綠加入后，硫代硫酸鈉經(jīng)碘氧化生成的。四硫磺酸鈉對大腸菌群有抑制作用，但不穩(wěn)定，所以碘液和煌綠必須在臨用前加入。具體原理可以參考陸橋官網(wǎng)四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）。

沙門氏菌檢驗流程詳解（一）

SC增菌液配置時若過度加熱，或存放時氧化吸潮，則溶液易出現(xiàn)磚紅色沉淀，此時培養(yǎng)基不能使用。原因是亞硒酸鹽被氧化失效，選擇性下降。若SC增菌液接種時為淡黃色溶液，培養(yǎng)后呈磚紅色，這屬于正?，F(xiàn)象，說明增菌液中有細菌大量增殖。具體原理可以參考陸橋官網(wǎng)亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）。

沙門氏菌檢驗流程詳解（一）

為什么TTB和SC要求同時使用呢？

根據(jù)資料顯示，傷寒沙門氏菌不能在TTB上生長，可以在SC上正常生長，所以兩種培養(yǎng)基具有一定互補性。我們將幾種常見沙門氏菌標準菌（傷寒、鼠傷寒、腸炎沙門等）分別微量接種TTB和SC，發(fā)現(xiàn)只有傷寒沙門氏菌在TTB上基本澄清，而SC上明顯渾濁，與資料描述基本一致。傷寒沙門氏菌只是我們發(fā)現(xiàn)的其中一種，由于沙門氏菌的種類繁多，為了避免漏檢，兩種培養(yǎng)基一定要同時使用。

沙門氏菌檢驗流程詳解（一）